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牦牛巴氏杆菌和葡萄球菌的分离鉴定

    2007年7月初,农十二师104团某牛场牦牛因阴雨天气转场。造成牛群突然发病、死亡,主要是犊牛。发病率为3%;致死率为20%。其临床症状:病初体温高达41℃~42℃,精神沉郁,呼吸加快,有痛苦性干咳,下痢,气味恶臭。病理变化:肝肿胀、质脆,个别牛肝表面有坏死灶;肾稍肿;淋巴结明显水肿、出血;肺脏表面有肝变区,呈大理石样花纹,有纤维素性胸膜炎变化,有化脓灶;心包积水;初诊为“牛出血性败血病”,一种以高热和败血症为特征的急性传染病。笔者对其进行实验室检验,确诊为牛巴氏杆菌和葡萄球菌混合感染,并采取了相应的预防措施,控制了本病的发生,报告如下。

    1材料与方法

    1.1材料(1)无菌采取牛心、肝、脾、肺等脏器,置4℃和20℃冰箱,待检。(2)普通琼脂平板、5%兔或羊鲜血琼脂平板、LB肉汤等。(3)健康昆明系小鼠12只(16~18g)

    1.2方法(1)病料进行触片,分别进行革兰染色、瑞特染色、镜检。(2)将病料分别无菌接种到LB肉汤普通琼脂平板、5%兔或羊鲜血琼脂平板,37℃培养1824 h,并进行细菌的纯化培养。(3)将纯培养物制成菌悬液给分别每组腹腔注射3只小鼠,0.2 mL/只。两只腹腔注射LB肉汤做阴性对照。(4)挑取纯培养物无菌接种于常规生化鉴定培养基中, 37℃培养24~48h。并上VITEK32型全自动细菌鉴定分析仪。

    2结果

    2.1病原菌检查:取肝、脾、肺等病料触片,革兰染色镜检,观察到革兰阴性小杆菌和阳性球菌;姬姆萨或美蓝染色镜检,观察到球菌和两极浓染的小杆菌。

    2.2菌落形态与培养特性:阴性小杆菌在LB肉汤培养24h后浑浊,连续培养2~3d,有菌膜产生,液体清彻,管底有黏稠液体;在普通琼脂平板上生长贫瘠;在鲜血琼脂培养基上形成灰白色、圆形、微隆起、半透明、湿润、表面光滑、边缘整齐的露珠样菌落,有溶血和不溶血两种菌落。

    阳性球菌在LB肉汤培养24h后浑浊。在普通琼脂平板上生长良好;在鲜血琼脂培养基上形成灰白色、圆形、隆起、表面光滑、边缘整齐的菌落,轻微溶血。

    2.3动物实验:阴性小杆菌3/3死亡。阳性球菌2/3死亡,1只精神沉郁后健活。阴性对照均存活。

    2.4生化鉴定:不溶血性小杆菌不在麦康凯上生长,靛基质为阳性,甘露糖阳性;溶血性小杆菌在麦康凯培养基上生长缓慢,靛基质为阴性,甘露糖阴性。根据VITEK32型全自动细菌鉴定分析不溶血性小杆菌为多杀巴氏杆菌,溶血性小杆菌为溶血性巴氏杆菌(溶血性曼氏杆菌,球菌为科氏葡萄球菌。

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