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奶牛新孢子虫病诊断方法研究进展

新孢子虫病(Neosporiasis)是由犬新孢子虫 ( Neospora caninum Dubey,1988)寄生于犬、牛、羊等多种动物细胞内而引起的一种原虫病。该病1984 年由挪威学家Jcerkas在患脑炎和肌炎的幼犬 体内**发现,1988年Dubey博士将其命名为犬新孢子虫[1]。犬新孢了虫的终末宿主是犬[2],牛、羊、犬、马、鹿、小鼠等均可作为中间宿主。虽然新孢子虫病是多种家畜共患的一种原虫病,但其对牛的危害尤为严重,主要造成母牛流产、产死胎以及新生儿的运动神经系统疾病,同时该病可垂直传播,带虫母牛可将虫体直接传给新生犊牛,已证实它是造成奶牛工业严重经济损失的一个重要原因。由于我国每年从欧美及周边国家引进大量种牛或商品牛,很可能将本病带入我国。本病防制的关键在于诊断,为此作者就近年国外学者奶牛新孢子虫病诊断方法进行了综述,供同行们参考。

1 临床诊断

生前诊断主要依靠临床症状观察。本病一年四季均可发生,但高峰多出现在夏季,感染在母畜间不存在年龄差异,以妊娠6个月以前流产的胎儿血清 阳性比例较高,引起的流产常呈散发性或地方性流行,因此当出现母畜流产,死产,新生儿瘫痪、畸形,共济失调,肌肉萎缩,抽搐或其它运动神经系统疾病 症状时,特别是一群或多群出现此类症状时应怀疑是否为新孢子虫感染[3,4] 。

2 病原学诊断

2.1 病理组织学检查

根据 N.caninum 的寄生部位,在新生儿的肌肉、脑组织、呼吸道分泌物及皮肤脓包等活组织中均能检查到 N.caninum 。应采集流产胎儿的脑、脊髓、心脏及肝等组织进行常规组织学检查。可见多灶性、非化脓性脑炎、神经炎、心肌炎、骨骼肌炎、肝炎以及细胞浸润等,但要确诊,必须检测到 N.caninum 速殖子和(或)组织包囊[5] 。

2.2 病原的分离培养

为了分离及培养 N.cani-num 病原,可采集待检动物病料组织,匀浆后皮下接种小鼠、大鼠、小沙鼠、犬、猫、家兔等。接种剂量依 据动物种类不同而不同。发病后采集中枢神经或内脏组织进行特异性检验,也可进行传代接种。 N. caninum 的体外培养已获成功,可在牛肾细胞、Vero细胞等传代细胞系中生长发育,常用牛单核细胞和牛心肺主动脉内皮细胞进行培养。Davison等[6] (1997)将约10 g新鲜的死胎犊牛脑组织用0.5%的胰蛋白酶匀浆消化后接种到6份Vero细胞上。在 含有5%CO2、95%空气混合物的RPMI-1640培养液中,于37°C 下维持培养。接种后29天在一份培养 液中**观察到典型的 N.caninum 速殖子。Ya- mane等[7](1997)采集16头流产胎儿和疑似新孢子 虫病犊牛组织样本,接种于牛心肺主动脉内皮细胞和猴肾细胞培养物中,接种后49天在一份细胞中观 察到 N.caninum 速殖子。这表明病原的分离和体外培养可用于新孢子虫病的特异性诊断。

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